l  仪器介绍

Smart Spec Plus由光源（氙灯）、检测器（光敏二极管阵列）、内置程序、显示屏、打印机和石英比色杯等组成

Smart Spec Plus具有性能优越、运行稳定功能强大和价格经济等优点，被应用于DNA/RNA和寡核苷酸定量、蛋白定量、监控细胞培养生长状况、简易动力学分析、波长扫描和峰检测等。

l  仪器性能

1．波长范围：200-800nm

2．光谱带宽：<5nm

3．吸收精确度：0.5AU（±0.01），1.0AU（±0.02）

4．吸光度的重复性：0.5AU（±0.005），1.0AU（±0.01）

5．灵敏度：μg/ml样品浓度（寡核苷酸为pmol/μl）

6．光束高度（Z维）：8.5mm

7．工作温度及电源：15-35℃，90-260VAC、47-63 Hz

 

l  操作规程

一、DNA/RNA 测定

选择DNA/RNA键

1、    选择核酸的类型

按select可以滚动选择其它类型核酸，按emter确定选择

2、    确定转换因子

A、   dsDNA，ssDNA或者RNA

如果选择的是dsDNA，ssDNA或者RNA，下一个屏幕显示可以自定义的转换因子。转换因子是用来根据吸光度换算核酸浓度的参数。如果次转换因子可以应用，按enter。如果不能使用，按select把yes切换城no，按enter。

默认的转换因子确认或修改后，仪器已经准备好测量核酸的吸光度，并且能把吸光度转换成浓度。

B、   DNA oligo或RNA oligo（寡聚核苷酸）

如果选择的是DNA或RNA的寡聚链，则首先必须提供其分子量和摩尔吸光系数或者质量/浓度转换系数。如果这些都不清楚，仪器会给出一个估计值。

如果您知道摩尔吸光系数，按select从NO转换成YES，按ENTER。如果您不知道，按ENTER，并且跳到ii操作。

ⅰ、如果知道摩尔吸光系数，用数字键输入，按ENTER。

仪器接着提示输入分子量。

如果知道分子量，按SELECT，转换NO为YES，按ENTER。

如果不知道，按ENTER，跳到b操作。

a.     如果知道分子量，用数字键输入，按ENTER。

按右向键（CONTINUE），继续。

按READY开始读数。

b.     如果不知道分子量，分别输入A,C,G,T的数量，按ENTER。

仪器会计算分子量和摩尔吸光系数。

按右向箭头，选择继续。

按READY开始读数。

ⅱ、如果不知道摩尔吸光系数，但是知道质量/吸光度转换系数。

    按SELECT键，转换NO为YES，

    按ENTER。

    如果不知道质量/吸光度转换系数，按ENTER键，跳到ⅲ操作。

    用数字键输入转换系数，

    按ENTER。

    仪器询问分子量，这样可以用吸光度转换浓度。

    如果知道分子量，按SELECT，从NO转换到YES，按ENTER.

    如果不知道寡聚核酸的分子量，按ENTER,跳到b操作。

a.     如果知道分子量

用数字键输入分子量，按ENTER

按右向键（CONTINUE），继续。

按READY开始读数。

c.     如果不知道分子量，分别输入A,C,G,T的数量，按ENTER。

仪器会计算分子量和摩尔吸光系数。

按右向箭头，选择继续。

按READY开始读数。

ⅲ、如果不知道摩尔吸光系数或者质量/吸光度转换系数。

    仪器会估算摩尔吸光度系数和质量/吸光度转换系数。您必须选择下面的三种方法之一：长度，组成，序列。计算的摩尔吸光度系数和分子量会在最后显示出来。

二、蛋白的测定

1、    选择样品类型。按PROTEIN。

用SELECT键选择不同的测定方法，BRADFORD法, LOWRY法, UV PROTEIN法, BCA法或者其它方法。

按ENTER，仪器会根据选择的方法调整检测波长，检测样品。

如果选择OTHER，则必须输入读数的波长。

2、    扣除背景

仪器提示您是否要扣除背景。

如果不想扣除背景，按ENTER，跳到3操作。

如果想扣除背景，按SELECT，转换NO为YES，按ENTER

用数字键输入检测波长，按ENTER.

3、    标准曲线。一旦您选择了一种检测方法，仪器会提示您是否做一个新的标准曲线。您可以应用以前保存的标准曲线，也可以重新做一个新的标准曲线。

如果您想做一个新的标准曲线，按ENTER，转到B操作。如果不想做标准曲线，按SELECT，转换YES为NO，按ENTER.

A、      如果不做标准曲线。仪器会提示是否用存储的标准曲线。

如果想调用，按ENTER，跳到ⅱ操作。如果不想调用，按SELECT，转换YES为NO，按ENTER。

ⅰ、如果不想调用标准曲线。仪器会提醒，不能把吸光度转换为浓度。

    如果想让仪器把吸光度转换为浓度，按SELECT，转换YES为NO，按ENTER。仪器会再次提醒您做一个新的标准曲线。如果浓度不能转换不要紧，按ENTER，仪器准备好读取吸光度值。

ⅱ、如果想调用标准曲线。

    按SELECT，滚动显示标准曲线的文件，选择好后按ENTER.。

    选择好标准曲线后仪器会提醒您查看斜率、截率、相关系数和日期。这些数据会在最后打印报告时显示出来。

B、如果选择新建标准曲线。第一步是仪器校正，系统会提示您校正数字从1-9。

用数字键输入空白样品的数量，按ENTER.

仪器会提醒您把标准品一个一个的放入仪器。

每放入一个空白样品，按READ BLANK。读数完成后仪器校零。

按右向箭头返回。

完成空白样品的测定后，仪器提醒您确定标准品的数量。

用数字键输入标准品的数量，按ENTER.

仪器提醒确定标准品的浓度单位，最好一致。

用SELECT键选择标准品的浓度单位，μg/ml，ng/ml

用数字键输入浓度值，按ENTER.

把标准品放入仪器中，按READ SAMPLE读数。

如此重复，直到所有的标准品测量完毕。

仪器计算标准曲线，跳转到C操作。

C、   编辑标准曲线数据。所有标准品测量完成后，仪器提示编辑标准曲      线的数据。您可以重新测某一个标准品，或者编辑每个标准品的浓度信息。

如果不想修改数据，按ENTER，跳转到D操作。

D、 完成一个新的标准曲线。仪器提醒您查看新标准曲线的斜率，截率，相关系数等参数。如果您选择打印所有的报告，则这些信息在最终的报告中都有详细的数据。

E、  打印标准曲线。